HLA-B27属于1型MHC基因。基本上表达在机體(tǐ)所有(yǒu)有(yǒu)核细胞上，特别是淋巴细胞表面有(yǒu)丰富的含量。使用(yòng)荧光定量标准微球，校正HLA-B27实验条件后，测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达水平。若HLA-B27表达水平大于标准微球设定MARK，则為(wèi)阳性结果;若HLA-B27表达水平低于标准微球设定MARK，则為(wèi)阴性结果。

　　实验试剂

　　Anti-HLA-B27 Kit(美國(guó)BD Biosciences公司;CAT:340183)，

　　1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE

　　2、HLA-B27 Calibration beads

　　3、FACS Lysing Solution

　　实验步骤

　　1、标本采集：使用(yòng)EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。

　　2、染色和固定细胞：

　　(1) 标本管编号A，取一只流式专用(yòng)管A1。

　　(2) A1管加入Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 30ul。

　　(3) A1管中再加入全血50Ul，混均。

　　(4) 置室温，避光孵育15min。

　　(5) 加入FACSLysing溶2.0ml，置室温，避光孵育10min。

　　(6) 300g离心5min，弃上清液。

　　(7) PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。

　　(8) 1%多(duō)聚甲醛0.5mL。

　　3、上机检测;分(fēn)析结果;打印实验报告。

　　临床意义

　　HLA-B27抗原表达与强直性脊椎炎发病具有(yǒu)高度的疾病相关性。在强直性脊椎炎患者中，95%以上个體(tǐ)是HLA-B27抗原阳性;而在健康人群中HLA-B27抗原表达阳性者不足7%。HLA-B27阳性个體(tǐ)的该病相对危险率达300%以上。现今发现与HLA-B27高度相关的疾病主要有(yǒu)：强直性脊椎炎、莱特病(包括腹泻、多(duō)发性关节炎、尿道炎的综合症)和急性葡膜炎。最近研究还认為(wèi)与心肌炎等心脏病有(yǒu)关。

　　1、 先用(yòng)HLA-B27标准微球校准，设定正确的“MARK”。

　　2、 收集T细胞太少(少于500个)、碎片污染太多(duō)(超过10%)、门中T淋巴细胞不纯(小(xiǎo)于90%)可(kě)能(néng)引起实验结果不正确。

　　3、 整个实验过程中注意避光、避免抗體(tǐ)、血液粘附于试管壁，否则细胞不能(néng)被染色或染色不充分(fēn)，而影响检验结果。

　　4、 溶血时间不宜过長(cháng)，否则会引进白细胞破碎