第64届美國(guó)血液學(xué)会(ASH)年会于2022年12月10-13日在線(xiàn)上線(xiàn)下盛大召开，在今年ASH大会中，中國(guó)免疫學(xué)会血液免疫分(fēn)会候任主委，中华医學(xué)会血液學(xué)分(fēn)会副主委、造血干细胞应用(yòng)學(xué)组组長(cháng)，北京大學(xué)人民(mín)医院张晓辉教授团队共有(yǒu)2篇oral和5篇poster入选，其中3篇為(wèi)移植后并发症相关研究进展，4篇為(wèi)免疫性血小(xiǎo)板减少症(ITP)相关研究进展，本文(wén)我们整理(lǐ)了ITP相关进展，以飨读者。

摘要号：914

中文(wén)标题：免疫性血小(xiǎo)板减少症骨髓高维度免疫特征分(fēn)析

第一作者：刘凤琪

通讯作者：张晓辉教授

异常的骨髓微环境被认為(wèi)在ITP的进展中起着重要作用(yòng)。质谱流式(CyTOF)是一种新(xīn)的细胞蛋白表型分(fēn)析方法，能(néng)够描述多(duō)种免疫细胞群的组成，发现新(xīn)的生物(wù)标志(zhì)物(wù)的特征。本研究的目的是概述ITP患者的骨髓细胞组成的高维度特征，总结细胞亚群及其功能(néng)变化，為(wèi)发病机制和临床治疗提供思路。

2021年7月至10月间纳入确诊ITP患者40例(男21例，女19例)，年龄23-71岁(中位年龄47岁)。根据疾病的发病时间和进展，将ITP患者分(fēn)為(wèi)了3个亚组：ITP-N1组包括15例新(xīn)诊断未治疗的ITP患者(病史≤3个月)，ITP-N2组包括10例未治疗的持续ITP患者(病史3-12个月)，ITP-R组包括15例接受标准治疗缓解后复发就诊的ITP患者。健康对照组(HC组)骨髓样本由10名造血干细胞移植供者捐献。

ITP患者血小(xiǎo)板计数范围為(wèi)(1~96)×109/L，中位数為(wèi)25×109/L。利用(yòng)CyTOF技术，将骨髓中的免疫细胞分(fēn)為(wèi)7个主要亚群，包括B细胞、γδT细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、自然杀伤(NK)细胞、树突状细胞(DC)和单核细胞。对比ITP患者和健康对照的骨髓细胞组成，DC和单核细胞的比例有(yǒu)显著差异。观察到ITP患者骨髓中单核细胞比例明显增加。在ITP患者中，DC中的pDC亚群比例呈下降趋势，而mDC的比例明显升高。根据CD56分(fēn)子表达的不同，研究者将NK细胞分(fēn)為(wèi)2个亚群，亚群之间具有(yǒu)不同的细胞因子产生模式和细胞毒功能(néng)。与健康对照相比，ITP-R组患者CD56dim NK细胞比例升高，CD56bright NK细胞比例明显降低;ITP-N1组和ITP-N2组未观察到类似结果。这提示ITP骨髓中的NK细胞可(kě)能(néng)在ITP复发中发挥作用(yòng)。

研究者进一步结合T细胞表面共刺激和共抑制分(fēn)子的表达，研究了ITP患者T细胞的功能(néng)状态。结果显示，ITP患者骨髓中CD4+和CD8+ naïve T细胞比例均降低，CD8+效应T细胞的比例明显增加。我们发现，共抑制分(fēn)子CTLA4在CD8+效应T细胞和CD4+ Tfh细胞中表达减少，共刺激分(fēn)子如CD28和ICOS在CD4+中心记忆T细胞中表达更多(duō)。结合血浆中可(kě)溶性因子的检测，发现血浆中B7.2水平与T细胞表面CD28表达呈正相关，与CTLA4的表达呈负相关。

研究结论

本研究结果表明，ITP不同阶段骨髓免疫细胞的比例变化和免疫检查点分(fēn)子的表达模式可(kě)能(néng)為(wèi)ITP的病理(lǐ)机制提供新(xīn)的见解，并為(wèi)ITP提供有(yǒu)前景的临床治疗靶点。

摘要号：2454

中文(wén)标题：艾拉莫德治疗慢性/难治性ITP的现实研究

第一作者：安倬玉

通讯作者：张晓辉教授

艾拉莫德是一种小(xiǎo)分(fēn)子化合物(wù)，是在中國(guó)和日本被广泛用(yòng)作治疗类风湿关节炎的新(xīn)型抗风湿药物(wù)。艾拉莫德抑制几种炎性细胞因子的产生，包括IL-1、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)，并减少免疫球蛋白的产生。类风湿性关节炎患者在接受艾拉莫德治疗后，Th1和Th17细胞计数显著减少。异常的T细胞功能(néng)和抗血小(xiǎo)板抗體(tǐ)的产生在ITP的发病机制中起着重要作用(yòng)，而艾拉莫德是一种可(kě)能(néng)用(yòng)于治疗ITP的药物(wù)。本研究的目的是研究伊格拉蒂莫德对ITP治疗的影响。

该研究于2020年12月开始，目前正在进行中。共有(yǒu)76名患者接受了至少3个月的艾拉莫德治疗。其中51名患者接受了超过6个月的治疗，30名患者至少接受了12个月。5名患者在3个月后退出观察：2名患者因NR，3名患者因疫情和财務(wù)原因，无患者因AE退出治疗。主要及次要终点包括第14天的初始反应(OR，血小(xiǎo)板计数≥30×109/L，基線(xiàn)血小(xiǎo)板计数至少增加2倍，无出血;CR，血小(xiǎo)板计数≥100×109/L)、缓解持续时间、出血评分(fēn)和不良事件(AE)。

基線(xiàn)时，73.5%的患者报告1至4级出血症状。治疗3个月后，出现任何出血症状的患者比例降至61.8%，并在整个研究期间始终低于基線(xiàn)水平。在基線(xiàn)时，63名患者报告使用(yòng)了联合用(yòng)药，在3至6个月期间减少了36.5%。最常停用(yòng)或减少的药物(wù)是糖皮质激素和利妥昔单抗。

研究结论

艾拉莫德治疗ITP具有(yǒu)良好的疗效和安全性，有(yǒu)可(kě)能(néng)成為(wèi)ITP的新(xīn)治疗方法。

摘要号：3771

中文(wén)标题：肠-胆汁酸-免疫轴调控T细胞稳态在免疫血小(xiǎo)板减少症发病机制中的作用(yòng)

第一作者：刘凤琪

通讯作者：张晓辉教授

在之前的一项研究中，研究者观察到ITP患者肠道微生物(wù)组的物(wù)种组成失衡和功能(néng)失调[Sci China Life Sci, 2020]。肠道屏障受损以及肠道菌群相关代謝(xiè)产物(wù)可(kě)能(néng)提供信号分(fēn)子，促进肠道与免疫系统之间的交流。例如，胆汁酸(BAs)在肝脏中合成，并在肠道中转化為(wèi)次级BAs，最近被认為(wèi)是免疫系统的重要信号代謝(xiè)产物(wù)。胆汁酸受體(tǐ)法尼醇受體(tǐ)(FXR)还能(néng)抑制TLR4/MAPK通路，参与调节免疫应答(dá)。本研究探究了肠-胆汁酸-免疫轴在ITP的发病机制中的作用(yòng)，并且发现奥贝胆酸(OCA)治疗可(kě)以修复肠道屏障，恢复肠-胆汁酸平衡，以减少ITP中血小(xiǎo)板的破坏。

通过构建ITP主动型小(xiǎo)鼠模型，采用(yòng)组织病理(lǐ)分(fēn)析、16S扩增子测序、靶向胆汁酸代謝(xiè)组學(xué)和实时荧光定量PCR等方法，探讨肠道屏障功能(néng)、肠道菌群组成及粪便和血浆中胆汁酸代謝(xiè)物(wù)的变化。使用(yòng)OCA对小(xiǎo)鼠骨髓来源树突状细胞(DC)进行體(tǐ)外干预及ITP小(xiǎo)鼠模型體(tǐ)内治疗，研究OCA对肠道胆汁酸代謝(xiè)和T细胞分(fēn)化的影响。在临床样本研究中，我们纳入了65例未治疗ITP患者和62例健康对照，采集骨髓及粪便样本，利用(yòng)宏基因组测序、胆汁酸靶向代謝(xiè)组學(xué)和流式细胞术探讨ITP患者“肠-胆汁酸-免疫”轴的特征。

在ITP小(xiǎo)鼠模型中，肠道屏障被破坏，H&E染色显示IECs脱落，FITC -右旋糖酐从肠粘膜渗漏进入外周循环。肠道上皮细胞转录组RNA测序显示，ITP小(xiǎo)鼠claudin-4和claudin-8的表达显著降低。由于肠道屏障受损，ITP小(xiǎo)鼠血浆中LPS水平升高。16S扩增子测序结果显示，肠道菌群中厚壁菌门:拟杆菌门比例升高，粪便中BAs含量升高，尤其是β-MCA等初级BAs含量增加。作為(wèi)FXR拮抗剂，β-MCA的积累抑制了肠道上皮细胞、肝细胞和免疫细胞中FXR的活性。在體(tǐ)外FXR拮抗剂Z-guggulsterone刺激后，观察到小(xiǎo)鼠骨髓来源的DC诱导Th1分(fēn)化增加，这可(kě)以被FXR激动剂(GW4064或OCA)逆转。DCs分(fēn)泌IL-12可(kě)诱导Th1分(fēn)化，并受TLR4/MAPK/p38通路调控;OCA可(kě)通过激活FXR抑制TLR4通路的活化。在體(tǐ)内，OCA增加了ITP小(xiǎo)鼠肠道claudin-4和claudin-8的表达，恢复了胆汁酸代謝(xiè)的平衡。经过OCA治疗后，ITP小(xiǎo)鼠骨髓中Th1/Th2失衡得到纠正，體(tǐ)内活體(tǐ)成像观察到ITP小(xiǎo)鼠脾脏和肝脏中血小(xiǎo)板破坏明显减少。

ITP临床样本研究表明，ITP患者肠道菌群失调，表现為(wèi)厚壁菌门丰度增加。ITP患者的胆汁酸池显示骨髓中初级BAs的比例增加。體(tǐ)外提取培养ITP骨髓单个核细胞，经OCA體(tǐ)外干预72h后，人骨髓单个核细胞中Th1细胞比例明显降低，提示OCA对ITP患者有(yǒu)治疗作用(yòng)。

研究结论

本研究初步揭示了ITP患者和小(xiǎo)鼠模型中“肠-胆汁酸-免疫”轴的特征，體(tǐ)外和體(tǐ)内研究证实，OCA可(kě)以修复肠道屏障，纠正肠道菌群失调和胆汁酸代謝(xiè)异常，并通过MAPK信号通路减少DC诱导的Th1细胞分(fēn)化，减少ITP血小(xiǎo)板的破坏。本研究為(wèi)临床靶向“肠-胆汁酸-免疫”轴治疗ITP提供了理(lǐ)论依据。

摘要号：3872

中文(wén)标题：西格列汀通过AMPK/mTOR途径抑制免疫性血小(xiǎo)板减少症患者巨噬细胞的过度自噬以促进巨核细胞生成

第一作者：吴瑾

通讯作者：张晓辉教授

骨髓巨噬细胞(BM MΦ)在调节ITP患者巨核细胞生成中的特殊作用(yòng)尚未阐明。据报道，西格列汀是一种DPP-4抑制剂，通过调节SDF-1α和几种集落刺激因子，在造血细胞的产生和植入中发挥关键作用(yòng)，促进造血干细胞和造血祖细胞的恢复。然而，西格列汀是否有(yǒu)促进ITP巨核细胞成熟和血小(xiǎo)板生成的潜力尚不清楚。因此，本文(wén)探索巨噬细胞自噬对ITP患者巨核细胞生成的影响，并研究其在ITP发病机制中的潜在作用(yòng)，探索西格列汀是否可(kě)能(néng)成為(wèi)ITP的潜在治疗药物(wù)。

BM MΦ和CD34+细胞分(fēn)离自ITP患者和健康对照受试者。通过WB检测和透射電(diàn)镜证实了ITP患者骨髓巨噬细胞中的过度自噬。PCR和Western blotting用(yòng)于评估ITP-MΦ中A20和自噬相关的AMPK/mTOR/ULK1通路蛋白的表达。携带A20 cDNA/shRNA的载體(tǐ)被转入到来自健康对照受试者或ITP患者的BM MΦ中。不同BM MΦ群體(tǐ)分(fēn)别与CD34+细胞共培养。研究者比较了BM MΦ支持巨核细胞生成的能(néng)力，通过流式细胞仪测定不同阶段MKs的相对百分(fēn)比以及培养物(wù)中巨核细胞和血小(xiǎo)板的计数。體(tǐ)外评估了西格列汀恢复ITP-MΦ受损自噬的机制。

LC3-II/LC3-I和Beclin1在ITP-mφ中表达增加，而P62的表达减少。自噬小(xiǎo)泡的数量也增加，表明ITP-mφ的自噬作用(yòng)增强。进一步的研究证实，ITP-mφ调节巨核细胞生成，这依赖于A20介导的自噬相关的AMPK/mTOR/ULK1途径。用(yòng)A20-shRNA抑制A20表达抑制了AMPK/mTOR/ULK1通路，减轻了ITP-MΦ中过度的自噬，从而增加了ITP-mφ共培养系统中巨核细胞的数量、高倍體(tǐ)巨核细胞的比例和产生的血小(xiǎo)板数量。用(yòng)自噬抑制剂3-MA抑制自噬逆转了MΦ中A20过度表达诱导的过度自噬，并使巨核细胞的分(fēn)化和成熟正常化。用(yòng)AMPK抑制剂Compound C抑制AMPK/mTOR/ULK1信号通路逆转了A20过度表达诱导的AMPK/mTOR/ULK1自噬通路的增强。发现西格列汀在體(tǐ)外抑制ITP-MΦ中A20和AMPK/mTOR/ULK1自噬通路蛋白的表达。西格列汀提高了ITP-MΦ促进巨核细胞分(fēn)化发育和血小(xiǎo)板生成的能(néng)力。总共有(yǒu)56名皮质类固醇耐药性或复发性ITP患者接受了西格列汀治疗。11例(19.6%)患者观察到完全缓解，21例(37.5%)患者观察到完全缓解。

研究结论

A20介导AMPK/mTOR/ULK1信号通路调节ITP-MΦ细胞的自噬，并影响巨核细胞生成和血小(xiǎo)板形成。西格列汀可(kě)以抑制ITP-MΦ中A20介导的AMPK/mTOR/ULK1信号通路，从而促进巨核细胞生成。西格列汀在皮质类固醇抵抗/复发性ITP患者中产生持续反应，并表现出良好的安全性。

参考来源：

1.Feng-Qi Liu, Qingyuan Qu, Qi Chen, et al. High Dimensional Mapping of Bone Marrow Immune Characteristics in ImmuneThrombocytopenia. 2022 ASH. Abstract#914.

2.Zhuo-Yu An, Ye-Jun Wu, Yun He, et al. Real-World Study of the Use of Iguratimod to Treat Chronic/Refractory ITP. 2022 ASH. Abstract#2454.

3.Feng-Qi Liu, Qingyuan Qu, Yu-xiu Chen, et al. Gut-Bile Acid-Immune Axis Regulates T Cell Homeostasis in the Pathogenesis of Immune Thrombocytopenia. 2022 ASH. Abstract#3771.

4.Jin Wu, Yun He, Haixia Fu, et al. Sitagliptin Alleviates Excessive Autophagy in Macrophages in Immune Thrombocytopenia Patients to Promote Megakaryopoiesis Via the AMPK/mTOR Pathway. Abstract#3872.